BioximiaForYou

амилаза

Алфа-амилаза (диастаза, алфа-1,4-глюкан-4-глюкан-хидролаза) принадлежи към класа хидролази, които катализират хидролизата на полизахариди, включително нишесте и гликоген, до декстрини и прости ди- и монозахариди (малтоза, глюкоза).

Амилазата в най-големи концентрации е в панкреаса и слюнчените жлези, съответно - под формата на панкреатични и слюнчени изоензими. При физиологични условия серумната амилаза се състои от 40% от панкреатичната амилаза и 60% от слюнчената амилаза. Като се използват специфични инхибитори или разделяне чрез електрофореза, е възможно да се установи произхода на ензима, присъстващ в плазмата. Амилазата се отстранява от плазмата чрез бъбреците и се екскретира с урината. Това води до по-голямо съдържание на информация, определящо активността на алфа-амилазата в урината като тест за оценка на функционалното състояние на панкреаса. Растежът на амилазната активност е от най-голямо значение при диагностицирането на заболявания на панкреаса.

Клинична и диагностична стойност:

Активността на кръвната алфа-амилаза и урината варира значително през деня.

Хиперамалаземия - повишаване на активността на амилазата в кръвния серум.

Ø Остър панкреатит - максималните стойности се появяват през първите 6 - 12 часа след появата на симптомите на заболяването. След това ензимната активност намалява, нормализира се за 2-5 дни. Ако активността остане увеличена за повече от 5 дни, това показва увеличение на възпалението.

Ø Заболяване при хроничен панкреатит

Ø Перфорация на язва на дванадесетопръстника

Ø Чревна обструкция

Ø Остър апендицит

Ø Алкалоиди (морфин, хероин, кодеин)

Ø отравяне с метанол

Ø Големи дози етанол (за алкохолици)

Хипоамилаземия - намаляване на активността на амилазата в кръвния серум (практически няма диагностична стойност).

Ø Панкреатична некроза

Ø Инфаркт на миокарда

Хиперамалазурия - повишена екскреция на амилаза в урината.

Ø Остър панкреатит - повишаване на ензимната активност се наблюдава през първите 24 часа от възпалението. Повишената екскреция на ензима в урината продължава през следващите 7 до 10 дни, въпреки факта, че активността на амилазата в кръвта след 3-4 дни е нормална.

Ø Рак на панкреаса

Ø Перфорация на язва на дванадесетопръстника

Ø Жлъчнокаменна болест

Ø Заболявания на слюнчените жлези, паротит, камъни в слюнчените канали

Хипоамилаза - намаляване на освобождаването на амилаза в урината.

Ø Бъбречно заболяване

Ø заболяване на черния дроб

"Определяне на алфа-амилазната активност в биологични течности по унифицирания метод на Караве"

Принцип: под действието на алфа-амилаза, нишестето се хидролизира до образуване на продукти, които не дават цветна реакция с йод. Интензивността на намаляване на цвета на йод-нишестения комплекс на единица време е пропорционална на активността на ензима.

Изследваният материал: свеж серум, урина.

Комплектът включва:

Реагент №1 - буфер

Реагент № 2 - концентриран субстрат

Реагент №3 - концентриран йоден разтвор

Реагент № 4 - разтвор на калиев флуорид

Реагент №5 - солна киселина

Подготовка на реагентите за процедурата за анализ:

Работен разтвор на основата: смесете реагентите № 1 и № 2 в съотношение 24: 1.

Работен разтвор на йод: смесете дестилирана вода, реактив № 3 и реактив № 4 в съотношение 7: 1: 2.

Работен разтвор на солна киселина: съдържанието на бутилката № 5 се разрежда с дестилирана вода 16 пъти.

Курсът на определяне:

реагент

Опитен образец

Контролна проба

BioXplorer

амилаза

а-амилаза [а - (1,4) -глюкан-4-глюканохидролаза, KF 3.2.1.1] е ензим, който хидролизира вътрешните 1,4а-гликозидни връзки на нишесте, гликоген и други глюкозни полимери. Основните източници на а-амилаза при хората са панкреасът и слюнчените жлези. Многобройни изоформи, изолирани от биологични течности и човешки тъкани, вероятно са хетерогенни продукти от пост-транслационни промени на две семейства амилазни изоензими, чийто синтез е кодиран от два локуса на Atu-1 гена, слюнчен (C) амилазен тип и Atu-2, панкреатичен (P) вид ензим, тясно свързан в хромозома 1. Изоензимите С и Р нямат големи разлики в аминокиселинния състав. Две изоформи се изолират чрез гел филтрация върху сефадекс в фракция С-амилаза, една от които съдържа въглехидрати. Молекулна маса на въглехидратни изоформи, 57 kDa, свободна от въглехидрати - 55 kDa. Изоелектрични точки на основните изоформи на С-изоамилази от 5.5 до 6.5. Р-групата на изоамилазата има по-ниско молекулно тегло (53 kDa) и не съдържа въглехидрати. Изоелектричните точки на тези протеини варират от 5.7 до 7.0.

Убедителното доказателство, че амилазата тип P се формира само в панкреаса, е липсата на този изоензим при индивиди с тотална панкреатектомия. За разлика от това, а-амилазата С-изоензим може да се синтезира в различни органи и тъкани. Висока активност на С-амилаза е фиксирана в тъканта на фалопиевите тръби и съдържанието на кистата на яйчниците. Специфичната група изоамилази, произведени от тъканите на женските полови органи, не се открива в серума или урината на здрави хора; разпределението на изоамилазите е идентично при мъжете и жените. Изоамилазите, принадлежащи към С-групата, също се откриват в човешкото мляко и течност за рани.

Клиничното значение на определянето на активността на амилазата в серума.

Определянето на серумната а-амилазна активност е най-честият тест за диагностициране на остър панкреатит. При остър панкреатит, ензимната активност в серума се увеличава 3–12 часа след болезнена атака, достига максимум след 20-30 часа и се връща към нормалното с благоприятен курс в рамките на четири дни. Активността на α-амилаза (диастаза) в урината се увеличава 6-10 часа след повишаване на серумната активност и се връща към нормалното, най-често три дни след повишаване.

Сега е широко известно, че повишаването на общата активност на а-амилазата не е специфично за панкреатит и други заболявания на панкреаса. Клиничните проучвания показват, че повишаването на активността на а-амилазата се проявява при редица заболявания, които включват чревна обструкция, заболявания на жлъчните пътища, апендицит, паротит и извънматочна бременност. Чувствителността и специфичността на определянето на а-амилазата при диагностицирането на остър панкреатит се увеличават с промени в границите на нормалните стойности (дискриминационното ниво на нормата и патологията е активност 1,5-2 пъти по-висока от горните граници на нормата). В този случай определянето на α-амилазната активност е най-информативната за първия ден от развитието на острия панкреатит. Според някои автори определянето на серумната α-амилазна активност при хроничен панкреатит няма диагностична стойност.

При хората, а-амилазата, която преминава свободно през филтрационната бариера на бъбречните тела, реабсорбира епителните клетки на бъбречните тубули по същия начин, както другите нискомолекулни серумни протеини. Повишаването на серумната амилазна активност може да бъде причинено от нарушено елиминиране на ензимите. Пример е състояние, наречено макроамилаземия, когато ензимът е свързан със серумните имуноглобулини и образува макромолекулен комплекс. Такъв комплекс не се филтрира в урината и не може да бъде отстранен с други механизми, което води до значително и понякога продължително увеличаване на активността на а-амилазата в кръвния серум. Макроамилаземия се наблюдава при здрави хора с честота 1%, при лица с хиперамилаземия с честота от 2,5%. Макроамилаземията може да бъде диагностицирана чрез метода на ултрацентрофугиране, EF, гел хроматография, също е предложен прост тест за утаяване на комплекса с полиетилен гликол.

Серумната α-амилазна активност често се увеличава при бъбречна недостатъчност, но не е съвсем ясно какво причинява това увеличение - увеличаване на образуването на ензим или намаляване на неговото елиминиране. В такива случаи може да бъде дадена допълнителна информация чрез определяне на скоростта на екскрецията на α-амилаза или изчисляването на ензимния клирънс.

Според много автори най-чувствителният и специфичен тест за диагностициране на панкреатита е нивото на активност на P-изоензима α-амилаза. Този тест е от особено значение, ако се установи нормална обща амилазна активност при пациент с предполагаема диагноза на панкреатит. Чрез намалена активност на Р-амилазата може да се диагностицира хроничен панкреатит. Пропорцията на P-изоамилазата в общата активност на а-амилазата е значително по-висока в урината, отколкото в серума, вероятно поради разлики в екскрецията на изоензимите от бъбреците. Въпреки това, диагностичната стойност на определяне на активността на а-амилазните изоензими в урината е по-ниска от тази в кръвта.

Експеримент - основният метод на науката
И наблюдението и измерването са включени в такъв сложен основен метод на науката като експеримент. За разлика от наблюдението, експериментът се характеризира с намесата на изследовател в позицията на изследваните обекти, чрез активно влияние върху предмета.

Почвата е уникален компонент на биосферата
В края на 19 век. В. Докучава, великият руски природонаучен, с изследванията си за чернозем и други почви на Руската долина и Кавказ установи, че почвите са естествени тела по своите външни характеристики и свойства на силите.

Анализ на урина
Анализът на урината е поредица от химически и физически тестове, резултатите от които показват специфичното тегло и рН на пробата и наличието и нивото на кръв, глюкоза и други компоненти в пробата. Тъй като основните данни при хронична бъбречна недостатъчност и получават.

амилаза

α-амилаза (диастаза, 1,4-a-D-глюкан хидролаза, EC 3.2.1.1.) катализира хидролизата на α-1,4-глюкозидни връзки на нишесте, гликоген и свързаните с тях полизахариди към малтоза, декстрини и други полимери. Молекулярната маса на ензима е около 48,000 D. Молекулата съдържа калциев атом, който не само активира ензима, но и го предпазва от действието на протеазите, а активността на амилазата се увеличава с влиянието на хлорни йони. В кръвта тя е представена от два изоензима: панкреатичен - Р-тип и слюнчен - S-тип, всеки от които е разделен на няколко фракции. Изоензимът от S-тип обикновено е 45–70% (средно 57%), а останалото е от типа P. И двата изоензима имат почти идентични каталитични и имунологични свойства, леко се различават по електрофоретичната подвижност, но са добре разделени чрез гел филтрация върху DEAE - Sephadex. Има и макроамилаза, която не се екскретира от бъбреците, но може да се открие в нормален кръвен серум (около 1% от здравите хора) и патология (2,5%).

Висока амилазна активност се наблюдава в паротидната и панкреасната жлеза. Въпреки това, неговата активност, макар и много по-ниска, се открива в големите и тънките черва, скелетните мускули, черния дроб, бъбреците, белите дробове, фалопиевите тръби, мастната тъкан. В кръвта ензимът се свързва както с плазмените протеини, така и с образуваните елементи. Ензимната активност е еднаква за мъже и жени и не зависи от естеството на приеманата храна и времето на деня.

Съществуващите методи за изследване на активността на а-амилазата в биологичните течности се разделят на две големи групи:

1. Захарифициране (редуктометрично), основаващо се на изследването на захарите, образувани от нишесте чрез редуциращия ефект на глюкоза и малтоза.

2. Амилокластици, въз основа на определянето на остатъка от неразложеното нишесте: t

  • според степента на интензивност на реакцията му с йод. Тези методи са по-чувствителни и специфични, но тяхната точност до голяма степен зависи от качеството на нишестето и от оптимизацията на условията за определяне.
  • вискозитет суспензия на скорбяла, не са с висока точност и не се използват сега.

3. Методите, използващи хромогенни субстрати - се основават на използването на комплекси субстрат - багрило, които под действието на а - амилаза се разпадат, за да образуват водоразтворимо багрило.

4. Методи, основани на свързани ензимни реакции: t

Скорбяла + Н2За Малтоза + Малтотриозе + Декстрин

Maltose + N2Около 2 глюкози

Глюкоза + АТФ Глюкоза - 6 - F + АТФ

Глюкоза-6-F + NADF глюконат-6-F + NADFN

Активността на ензима се определя от скоростта на натрупване на NADPH.

Два амилокластични метода бяха одобрени като унифицирани: Karavey (с устойчив нишестен субстрат) и Smith-Rohe.

Определяне на амилазната активност с оцветени
субстрат за фирма за набиране на персонал "Lachema"

принцип

α-амилазата катализира хидролизата на неразтворим оцветен субстрат от нишесте, за да образува синьо водоразтворимо багрило. Количеството на освобождаваното багрило е пропорционално на каталитичната активност на ензима.

Определяне на алфа-амилазната активност.

Алфа-амилаза (диастаза) е ензим, който извършва хидролитично разцепване на полизахариди до декстрини, малтоза и глюкоза. Крайните продукти на амилазата не дават цветна реакция с йод. Жлезите на панкреаса и слюнчените жлези са най-богати на амилаза. Амилазата се секретира в кръвта главно от тези органи.

Човешката кръвна плазма съдържа главно два вида амилаза: панкреасен и слюнчен, а третият тип амилаза е голяма или макроамилаза. С урината панкреатичната амилаза се екскретира главно, което е една от причините определянето на амилазата в урината да е по-информативно, отколкото в кръвта за оценка на функционалното състояние на панкреаса. Счита се, че 65% от активността на амилазата в урината се дължи на панкреатична амилаза, докато 60% от серумната амилолитична активност се осигурява от амилазата на слюнчените жлези. При остър панкреатит панкреатичната амилаза се увеличава в серума до 89%, а в урината - до 92%, без да се променят индексите на слюнчената амилаза.

Активността на амилазата в кръвта и урината претърпява значителни промени през целия ден, както и индивидуалните различия. Флуктуациите на активността на амилазата изискват изследването му в дневната урина за оценка на функцията на панкреаса.

Съществуващите методи за определяне на активността на а-амилазата са разделени на 2 групи:

1. Методът на крайна точка се основава на определяне на остатъка от неразграденото нишесте според степента на интензивност на неговата реакция с йод (метод Karavey).

2. Кинетичният метод.

серумна а-амилаза - 16-30 g / h * 1

урина а-амилаза - 28-160 g / h * l

1. Серумът не трябва да се хемолизира.

2. Условията на експеримента са от голямо значение, по-специално точното време на инкубация от 5 минути, така че не се препоръчва едновременно изследване на повече от 5 серума.

3. Определянето на активността на а-амилазата в урината се извършва подобно на определянето в кръвта, но в случай на хиперамилаза се препоръчва да се разрежда урината с последващо преизчисляване.

4. Активността на а-амилазата се влияе от лекарства - антибиотици, обезболяващи, а също и алкохол.

Увеличаването на активността на амилазата се проявява главно при заболявания на панкреаса.

При остър панкреатит активността на ензима в кръвта и урината се увеличава с повече от 10 пъти. Хиперамалаземията настъпва непосредствено след началото на заболяването, достига максимум до 12-24 часа, след което ензимната активност бързо намалява и се нормализира за 2-6 дни. Обикновено хипрамилазурия продължава по-дълго от повишаването на ензимната активност в серума, следователно, за 2-3 дни след болезнена атака, е по-информативно да се определи активността на а-амилазата в урината.

При хроничен панкреатит, рак на панкреаса, повишаването на ензимната активност не е толкова значимо. В допълнение, може да има леко увеличение на ензимната активност при заболявания, придружени от подобна клинична картина с остър панкреатит: остър апендицит, перитонит, перфорирана стомашна язва и др.

Ето защо, изразена амилаземия позволява да се диференцира остър панкреатит от хронични заболявания на панкреаса, както и от други остри заболявания на коремната кухина.

Почти винаги амилаземията е придружена от амилазурия. Но определянето на активността на амилазата в урината е по-малко точен диагностичен индикатор, тъй като освобождаването на амилаза в урината е свързано с бъбречна функция. Леко повишаване на амилазата в кръвта, докато намалява нивото му в урината, може да се обясни с нарушение на бъбречната екскреторна функция.

Намаляване на амилазната активност се наблюдава при некроза на панкреаса, чернодробни заболявания (хепатит, цироза), обширни изгаряния, захарен диабет, кахексия и др.

194.48.155.252 © studopedia.ru не е автор на публикуваните материали. Но предоставя възможност за безплатно ползване. Има ли нарушение на авторските права? Пишете ни Свържете се с нас.

Деактивиране на adBlock!
и обновете страницата (F5)
много необходимо

Определяне на амилаза в биологични течности

Амилазата в кръвта и нивото на този показател е нормално

  • Какво е този ензим
  • Методи за определяне
  • норма
  • Причините за увеличението
  • ниско четене

Един от важните компоненти на биохимичния анализ на кръвта е изследването на неговата ензимна активност. Това определя плазмената концентрация на различни ензими, които се произвеждат главно от определени органи. Този тип специфичност им позволява да се използват като диагностични критерии за тесен кръг заболявания. В тази статия ще обсъдим такъв показател като скоростта на амилазата, която се отнася до специфични маркери на патологията на панкреаса.

Какво е този ензим

В продължение на много години, неуспешно се борят с хипертония?

Ръководителят на Института: „Ще се учудите колко лесно е да лекувате хипертония, като я приемате всеки ден.

Счита се, че алфа-амилазата е един от ензимите на панкреатичния сок (панкреас), който участва активно в храносмилателния процес. Той се произвежда от екзокринни клетки и през отделителните канали навлиза в дванадесетопръстника, където е отговорен за разделянето на сложни въглехидратни компоненти на по-прости. Те участват в разграждането на гликоген и нишесте. Крайният резултат от тяхното действие трябва да бъде производството на проста глюкоза, която се консумира от организма, за да изплати енергийните нужди на клетките.

Но амилазата трябва да тече изключително в чревния лумен. Обикновено малко количество от него навлиза в системното кръвообращение, тъй като всяка клетка в процеса на жизнената дейност има пряк контакт с кръвта. Докато целостта на панкреатичните клетки не е нарушена, концентрацията на ензима не надвишава нормалните граници. Амилазата в кръвта поради високата си ензимна активност, засягаща всяка тъкан на тялото, може да причини тяхното унищожаване. Следователно неговото количество трябва да се поддържа на постоянно ниво.

За лечение на хипертония нашите читатели успешно използват ReCardio. Виждайки популярността на този инструмент, решихме да го предложим на вашето внимание.
Прочетете повече тук...

Методи и анализи за определяне на кръвна амилазна активност

Амилазата в кръвта циркулира по този начин: ензимът се секретира от жлезисти панкреатични клетки, влиза в кръвта и се пренася до всички съдове. В черния дроб той е частично неутрализиран. Тази част от ензима, която няма време да се срине, преминава през бъбречния филтър, където се концентрира и екскретира с урината. Този механизъм е основа за определяне на концентрацията на алфа-амилаза в различни биологични течности.

Основните анализи включват:

  • Биохимичен анализ за определяне на алфа-амилаза в кръвта;
  • Биохимичен анализ на урина за определяне на амилаза в урината (анализ на диастаза).

В клиничната практика често се използва вторият метод, тъй като той е технически много по-лесен за изпълнение и не изисква вземане на кръвни проби. Освен това той е по-чувствителен и специфичен. В действителност, в стабилно голям обем кръв и извънклетъчна течност, ензимът е в по-разредено състояние, отколкото в малко количество урина. Следователно, амилазната активност на урината е няколко пъти по-висока от тази на кръвната плазма.

Нормална производителност

Оценявайки резултатите от анализа, те трябва да бъдат сравнени с определени стандарти. Важно е да се има предвид, че нормата предполага оценка в определени мерни единици. Затова не забравяйте да обърнете внимание на тези знаци, които са изброени след номерата в колоната на резултатите от анализа. Освен това, скоростта на амилаза, определена в различни лаборатории, може да се различава поради използването на реагенти с различна чувствителност. Обикновено скоростта се посочва от лабораторията до резултата.

Общоприетите стандартни показатели за диастаза и алфа-амилаза в таблицата.

Биохимията, която определя амилазната активност на кръвта, се характеризира с факта, че скоростта на амилазата при жените и мъжете е идентична. Половите хормони нямат значителен ефект върху този ензим.

Причини и механизми за увеличаване на показателя

Правилното тълкуване на резултатите от анализите, за да се определи концентрацията на амилаза в плазмата или урината, може наистина да помогне при диагностицирането на редица заболявания. В клиничната практика най-често се срещат ситуации, при които амилазата или диастазата са повишени. Това показва какво е възникнало:

  • Повишена секреторна активност на панкреаса;
  • Наличието на препятствия в каналите на панкреаса или тяхната компресия, което усложнява изтичането на сок на панкреаса, съдържащ амилаза;
  • Инфекцията на панкреатичната тъкан е травматичен, възпалителен, некротичен (деструктивен) или неопластичен процес.

Следователно, увеличаването на кръвната алфа-амилаза и уринарната диастаза се отнася до специфични маркери за такива заболявания на панкреаса и неговите канали:

  1. При обостряне на хроничен панкреатит;
  2. При остър панкреатит, фокална панкреатична некроза (саморазрушаване на тъкан от жлеза чрез ензими), перипанкреатична инфилтрация или в началните стадии на тежка панкреатична некроза;
  3. Рак на панкреаса. Скоростта на амилазата се превишава в по-голяма степен, когато туморът се намира в главата и тялото на органа;
  4. Различни видове холелитиаза с холедохолитиаза (миграция на камъни в жлъчните пътища);
  5. Поражението на голямата дуоденална зърна на дванадесетопръстника под формата на стенотичен папилит, клиновидни камъни и ракови тумори.

Повишена амилазна активност при други заболявания и състояния

Понякога трябва да се сблъскате със ситуации, при които няма очевидни проблеми с панкреаса, но показателите за алфа-амилаза и диастаза надхвърлят нормалните граници. Това означава, че има:

  • Грешки в диетата;
  • Употреба на алкохолни напитки;
  • Обостряне на хроничен холецистит и възпалителен процес в черния дроб;
  • Извънматочна бременност;
  • Възпалително-деструктивни заболявания на коремните органи (перфорирана язва, апендицит, перитонит, чревна обструкция и др.);
  • Вирусни инфекции, придружени от полигландулит (множество възпалителни промени в почти всички слюнчени и панкреасни). Това се случва с паротит, цитомегалия и инфекция с вируса Епщайн-Бар.

ниско четене

Рядко се изисква дешифриране на тестовете, резултатите от които регистрират намаляване на амилазната активност на кръвта. Но все пак, понякога трябва да се изправиш пред нея. Това е възможно с:

  • Пълно или почти пълно разрушаване на панкреаса в резултат на панкреатична некроза;
  • Трансформация на рака на по-голямата част от панкреаса, при която практически няма нормални клетки със запазени функционални способности;
  • Отстраняване на цялата или субтотална резекция на панкреаса;
  • Генетични нарушения на ензимната активност в организма (муковисцидоза).

Нивото на амилаза в кръвта и уринарната диастаза е надежден флагман, който показва посоката на диагностичния път за заболявания на панкреаса. Правилната оценка на тестовете в съчетание с сравнението на резултатите от други видове изследвания оставя малък шанс редица заболявания да останат незабелязани.

Клинична и диагностична стойност за определяне активността на алфа-амилазата

В кръвта и урината

Активността на кръвната алфа-амилаза и урината през деня (както и от един ден на друг) варира значително. Освен това са наблюдавани значими индивидуални различия на тези показатели при пациентите без патология на храносмилателните органи. Като се имат предвид колебанията в екскрецията на алфа-амилаза в урината, се препоръчва да се изследва активността на ензима в урината, събрана на ден.

Промени в активността на алфа-амилазата в кръвта и урината се наблюдават по време на бременност. Hyperamylasemia. Активността на алфа-амилазата се увеличава значително при заболявания на панкреаса. При остър панкреатит активността на ензима в кръвта и урината се увеличава 10-40 пъти. Хипер-амилаземия се появява в началото на заболяването, достига максимум 12-24 часа след развитието, след това бързо намалява и достига до норма от 2 до 6 дни.

Активността на ензима може да бъде увеличена при редица заболявания, които имат подобна клинична картина с остър панкреатит, а именно: остър апендицит, перитонит и перфорирана стомашна и дуоденална язва. При пациенти с перитонит повишаването на амилазната активност е следствие от развитието на амилаза-образуващи бактерии. Обикновено активността на ензима при тези патологични състояния се увеличава 3-5 пъти.

Заболяванията, които причиняват сравнително малка хиперамилаземия с непанкреатичен произход (т.е., без пряко да засегнат самия панкреас) включват холецистит, холелитиаза, състояние, свързано с разкъсване на жлъчния мехур, бъбречно заболяване, бъбречна недостатъчност, метастази на ракови тумори в белите дробове и увреждане на слюнчените жлези. с обтурация на техните канали (ясна клинична картина на паротит улеснява обяснението на хиперамилаземия), простатит, травматично увреждане на мозъка, травматичен шок, изгаряния, пневмония, диабетна кетоацидоза, аборт, постоперативен период.

Активността на алфа-амилазата в серума също се увеличава при езофагеална перфорация, язва на стомаха, гастрит, остра чревна обструкция, исхемия и инфаркт на тънките черва, перитонит, руптура на тръбата по време на извънматочна бременност, салпингит, аортна аневризма.

Основните причини за хиперамилаземия са: нарушена секреция на секрети от жлези (алфа-амилазни производители), повишена пропускливост на хистогематогенната бариера в жлезите, тъканна некроза, нарушено освобождаване на ензими през бъбречния филтър.

Някои други хормони и много фармакологични лекарства, главно агенти, водещи до намаляване на сфинктера на Оди, причиняват адреналин: адреналин, хистамин, секретин, фуроземид, салицилати, антикоагуланти, морфин, пантофон, опиум, кодеин, тетрациклин, както и алкохол.

Независимо от факта, че хиперамилаземията почти винаги е придружена от перамилазурия, определянето на активността на урината на алфа-амилаза не винаги може да бъде точен диагностичен показател, тъй като освобождаването на амилаза в урината е свързано с бъбречна функция. В допълнение, бъбреците отделят само 24% от амилазата, секретирана от храносмилателните жлези от кръвта.

Изследването на активността на алфа-амилазата в ежедневната урина е по-надежден биохимичен тест за откриване на заболяване на панкреаса, отколкото изследване, основаващо се на анализ на една част от него. След действието на кръвната алфа-амилаза след пристъп на панкреатит се нормализира, тя може да остане повишена в урината до 7 дни.

Коефициентът "активност на алфа-амилаза в кръвта / алфа-амилазна активност в урината" е показател за функционалната полезност на бъбречния филтър.

Хипоамиламинът в клиничната практика е рядък. Наблюдава се при пациенти с чернодробни заболявания (хепатит, цироза), злокачествени тумори (особено при наличие на метастази в черния дроб), обширни изгаряния, кожа, диабет, хипотиреоидизъм, обичайни хранителни нарушения, загуба на тегло, кахексия и също под въздействието на интоксикация ( например при токсикоза при бременни жени). Намаляването на активността на алфа-амилазата най-често показва недостатъчност на екзокринната функция на суб-стомашната жлеза. Въвеждането на цитрати и оксалати води до намаляване на ензимната активност.

Определяне на общата лактатна дехидрогеназна активност

Лактатдехидрогеназа (L-лактат; NAD-оксидоредуктаза, EC 1.1.1.27) е гликолитичен (цитозолен цинк-съдържащ) ензим (молекулно тегло 135,000 D), който обратимо катализира окислението на L-лактат до пирувинова киселина. Незаменим участник в тази реакция е окислен никотинов аденин динуклеотид, използван като кофактор на ензима, който играе ролята на акцептор на водород.

Реакцията, катализирана от лактат дехидрогеназа, може да бъде представена, както следва:

SNSNONSOO "+ OVER + Лактат дехидрогеназа SNSSOSOO '+ OVER • H + H +

Ензимът е широко разпространен при хора. Според степента на намаляване на ензимната активност, органи и тъкани могат да бъдат подредени в следния ред: бъбреци, сърце, скелетни мускули, панкреас, далак, черен дроб, бели дробове, кръвен серум. В последния са открити няколко различни протеини (изоензими), които притежават каталитичните свойства на този ензим. Промените в структурата на протеиновата част на изоензимите определят техните различни физикохимични свойства (по-специално, различна електрофоретична подвижност в агар, нишесте, полиакриламид и други гелове).

В плазмата (серум) на кръвта бяха идентифицирани пет лактодехидрогеазни изоензими - LDG1, LDG2, LDGz, LDG4, LDG5 -, които са разположени в гела в низходящ ред на тяхната електрофоретична подвижност.

Всеки от изоензимите е тетрамер, образуван от субединици H и M. Установено е, че LDH1 фракцията се получава главно от тъканта на сърцето, LDH5 - от черния дроб. LDH в цитоплазмата на клетките и серумът са представени с 5 изоензима.

М субединицата се намира главно в тъкани с анаеробен метаболизъм, докато Н субединицата присъства в тъканите с преобладаване на аеробни процеси. Методът на електрофореза на носители спомага за разделяне на всичките 5 изомера на LDH, които представляват следния процент в кръвния серум на здрави хора: LDH; (14–26%), LDH ^ (29–39%), LDHs (20–26%), LDH4 (8–16%), LDHs (6–16%) - V.N. Titov et al. (1988).

Лактатдехидрогеназата се съдържа не само в плазмата, но и в значителни количества в червените кръвни клетки, така че серумът, използван за анализа, трябва да бъде свеж, без хемолиза.

Методите за определяне на общата активност на LDH се разделят на две основни групи: 1) кинетична, базирана на Warbur-оптичния тест (оптичен ефект, свързан с превръщането на NAD в NAD • N, и обратно) и 2) методи, които определят количеството образуван продукт или консумиран субстрат след фиксиран инкубационен период (крайни методи).

Работа № 32 Колориметричен динитрофенилхидразин метод за определяне активността на лактатдехидрогеназа в кръвния серум (според Севел и Товарек)

Принципът на метода. L-лактат в алкална среда в присъствието на серумен LDH и добавен NAD се окислява до пируват. Според степента на образуването му и преценено по активността на ензима.

реагенти

1. 0,45 mol / l разтвор на натриева млечна киселина. В мерителна колба с вместимост 100 ml се добавят 5 ml млечна киселина в концентрация 800 g / l и 10 ml млечна киселина при концентрация 400 g / l и се неутрализира с 2N разтвор на натриев хидроксид до слабо алкална реакция с рН 7,5 (при използване на фенолфталеин трябва да се развие слаба t розов цвят). Обемите се довеждат до марката с дестилирана вода.

2. 0.03 mol / l разтвор на натриев пирофосфат, рН 8.8. В мерителна колба с вместимост 500 ml се прибавят 6,69 g Na2 P2О5 • N2Около 50 ml от диети от разредена вода сместа се смесва старателно и рН на разтвора се нагласява на 8,8 с 1N разтвор на НС1. Обемът на съдържанието на колбата се довежда до марката с дестилирана вода. Реагентът е стабилен в продължение на един месец, когато се съхранява в хладилник.

3. Разтвор NAD. 3 mg NAD (химически чист) се разтварят в 1 ml дестилирана вода (при скорост 0,6 mg на проба). Реагентът е стабилен в продължение на 4 седмици, когато се съхранява в хладилник.

4. Разтвор на 2,4-динитрофенилхидразин. 19,8 mg 2,4-динитрофенилхидразин се разтварят в малък обем от 1 N разтвор на солна киселина чрез нагряване на сместа във водна баня. След охлаждане обемът се нагласява на 1 ml с IN солна киселина. На следващия ден реагентът се филтрира. Разтворът се съхранява в чиния от тъмно стъкло, използва се за една година.

5. 0.4 n разтвор на натриев хидроксид.

6. 1 n разтвор на солна киселина.

7. Стандартен разтвор на натриев пирувинова киселина. 11 mg кристална натриева пируровидна киселина се разтварят в малко количество дестилирана вода, прехвърлят се в 100 ml мерителна колба и обемът на разтвора се долива до марката с дестилирана вода. 1 ml разтвор съдържа 110 µg натриев пируват, което съответства на 88 µg пирувинова киселина. Работният стандартен разтвор се приготвя чрез разреждане на основния разтвор 10 пъти с дестилирана вода. В 1 ml работен разтвор от 8,8 μg пирувинова киселина.

Курсът на определяне. 0,1 ml серум, разреден 1: 2, се смесва с 0,3 ml разтвор на NAD и се загрява в продължение на 5 минути при 37 ° С. След това 0,8 ml нагряващ разтвор на фосфорна киселина и 0,2 ml разтвор на натриева млечна киселина, предварително нагрявани при 37 ° С. Сместа се инкубира при 37 ° С в продължение на 15 мин. След инкубирането пробата се напълва с 0,5 мл 2,4-динитофенилхидразин и се държи при стайна температура в продължение на 20 минути. След това добавете 5 ml разтвор на натриев хидроксид, смесете съдържанието на епруветката и след 10 минути

Абсорбцията се измерва в обхвата на дължината на вълната от 500–560 nm, например в PEC със зелен светлинен филтър в кювета с дебелина на слоя 10 mm. Запишете оптичната плътност на пробата, като вземете под внимание контрола на абсорбцията.

Контролната проба се поставя по същия начин, както експерименталната, но се разрежда 1: 2 серум след инкубиране на сместа. Изчислява се активността на ензима съгласно калибрационната графика. Активността на лактатдехидрогеназата се изразява в mmol пирувинова киселина, която се образува чрез инкубиране на 1 л серум за 1 час при 37 ° С.

За да получите данни за изграждане на калибрационна графика, трябва да направите следното. От работен стандартен разтвор на натриева пирувинова киселина се приготвя серия разреждания (Таблица 2). След това се налива 0,5 ml разтвор на 2,4-динитрофенилхидразин в епруветки. След това обработете стандартните проби по същия начин, както опитни.

Когато се постави контролната проба, към епруветката се прибавят 0,6 ml дестилирана вода, 0,8 ml пирофосфатен разтвор и 0,5 ml разтвор на 2,4-динитрофенилхидразин. След това пробата се третира по подобен начин.

За да се намерят показатели за активност на лактат дехидрогеназа в размер "mmol пирувинова киселина на 1 литър серум за 1 час инкубация при 37 ° C", броят на μmol пирувинова киселина в стандартната проба се умножава с коефициент 120 или количеството μg пирувинова киселина - с 1,41.

За да изразите активността на ензима в единици от новото измерение, можете да приложите друга формула:

Активност на лактат дехидрогеназа в mmol / (h • l) = C • 120: 88,

където С е количеството μg пирувинова киселина в пробата, 120 е коефициентът на превръщане на μg пирогроздена киселина в mg, 88 е факторът за превръщане на индикатори от mg до mmol.

При конструиране на калибрационна графика по оста на абсцисата, стойностите на ензимната активност са изразени, изразени в размери, mmol DCH1) и са представени в последната колона на таблица 33. Линейна връзка между концентрацията на пирувинова киселина и оптичната плътност е от 0 до 10 mmol / (h • l).

Клинична и диагностична стойност за определяне на амилазната активност

Амилазата е ензим, който разгражда нишестето и гликогена. панкреасът и слюнчените жлези са най-богатите. Съдържанието на серума амилаза се свързва с приема на храна: през деня активността е по-висока, отколкото през нощта.

Активността на амилазата в серума се повишава (хиперамилаземия) с:

Остър панкреатит (10-30 пъти, нормален за 6-7 дни, ако активността остане увеличена повече от 5 дни, това показва развитието на хроничен процес);

Обостряне на хроничен панкреатит;

Паротит (възпаление на слюнчените жлези);

Може да бъде причинен от алкохол, адреналин, наркотици.

Намаляване на активността на амилазата в серума (хипоамилаземия) се наблюдава, когато: t

Заболявания на черния дроб (хепатит, обструктивна жълтеница, цироза);

Повишена активност в урината (хиперамлаза) се наблюдава, когато:

Остър панкреатит (има по-голяма диагностична стойност от определението в серума, тъй като продължава повече от 7 дни);

Намаляването на ензимната активност в урината (хипоамилаза) се наблюдава, когато: t

Отговорете на въпросите:

Назовете мястото на локализация, оптималното рН и биологичната стойност на амилазата.

Напишете реакцията, която амилазата катализира.

Какъв клас ензими амилаза?

* Кои са основните болести, характеризиращи се с повишена активност на амилазата. Обяснете причината.

* Разкажете ни за причините, видовете, лабораторната диагностика и профилактиката на панкреатита.

3.8. Практическа работа "Определяне на серумната аминотрансферазна активност".

Целите на практическата работа:

да се изследва клиничната и диагностичната стойност на определяне на серумните аминотрансферази;

се научат да определят активността на аминотрансферазите в серума.

Задачи за самостоятелна работа:

Напиши в тетрадка принципа и методологията на практическата работа.

Оборудвайте работно място за практическа работа.

Правете практическа работа.

Направете необходимите изчисления.

Попълнете формуляра за анализ. Оценете резултатите.

Направете заключение за работата и рисунките.

Отговорете на допълнителни въпроси.

В резултат на трансаминиране, което се проявява под действието на AsAT и AlAT, се образуват оксалоацетна и пировинова киселини. Когато се добави разтвор на 2,4-динитрофенилхидразин, ензимният процес спира и се появяват хидразони на пирувиновата киселина. В алкална среда те дават оцветяване, чиято интензивност е пропорционална на количеството образувана пирувинова киселина.

1. Референтен разтвор натриев пирувинова киселина - 2 mmol / l.

2. 2,4 - динитрофенилхидразин - 1 mmol / l.

3. Натриев хидроксид - 0,4 п..

4. Субстрат AsAT / AlAT.

2. FEC, кювети на сантиметър.

4. Поставка за епруветки.

5. Пипети за 1 и 5 ml.

Проведете проучване на активността на аминотрансферазите в серума съгласно таблицата.

Диагностична стойност за определяне на серумната амилазна активност

При хората алфа-амилазата се секретира от панкреаса и слюнчените жлези, неговата малка активност се открива в тъканите на черния дроб и скелетните мускули. Молекулната маса на алфа-амилазата е сравнително ниска, за разлика от повечето ензими, тя се филтрира в гломерулите на бъбреците и се съдържа в урината. Алфа-амилазата се състои от два изоензима: тип панкреас (Р-тип) и слюнка (S-тип). При здрави хора серумът възлиза на около 70% от амилолитичната активност в слюнчения изоензим, а в урината приблизително същият процент е панкреатичната изоамилаза.

Хиперамилаземия и хиперамалазурия се наблюдават при много заболявания, но най-силно изразени при остър панкреатит, при който активността се увеличава главно (до 90% или повече) поради панкреатичния изоензим. При това заболяване най-голямото количество амилаза в кръвта и урината е отбелязано в първите 1-3 дни. Вирусният хепатит и ракът на панкреаса също предизвикват панкреатична хиперамилазурия с панкреатичен произход.

Чрез не-панкреатична хиперамилаземия, включват увреждане на слюнчените жлези, бъбречна недостатъчност. Причините за повишаване на b-амилазата в кръвта са нарушена секреция на жлези, съдържащи b-амилаза, недостатъчност на бъбречното екскреция на амилаза от организма.

Много фармакологични вещества, кортикостероиди, салицилати, тетрациклин, фуроземид, хистамин причиняват хиперамаласемия. За b-амилаза кръвта се характеризира с широки вътрешно- и междуиндивидуални вариации. Най-информативна е дефиницията за панкреатична изоамилаза.

Промяната в активността на алфа-амилазата в патологията.

Определянето на активността на алфа-амилазата придобива клинична и диагностична стойност при диагностиката и мониторинга на заболявания на панкреаса, храносмилателната система, увреждането на коремните органи. В някои случаи (например при заболявания на панкреаса) активността на един единствен изоензим, панкреатична алфа-амилаза, е от диагностично значение; при наблюдение на заболяванията на храносмилателния тракт е необходимо да се сравнят ензимната активност в серума (секреторна активност и допълнителна абсорбция от коремната кухина) и урина (често степента на амилазурия е по-стабилен и дълготраен показател от амилаземията).

Повишени стойности на активността на алфа-амилазата се наблюдават при:

Възпалителни панкреасни заболявания (остър, подут, хроничен, реактивен панкреатит). Хипер-амилаземията обикновено е остра (10-40 пъти по-висока), но често е краткотрайна, хиперамилазата също е значима, но нивото на алфа-амилаза в урината намалява много по-бавно, отколкото в кръвната плазма (серум). Това свойство е удобно да се използва, когато "късно" диагностично изследване на пациент с клинични признаци на панкреатит, обаче, за да следи хода на процеса, ензимната активност обикновено се измерва в двете биологични течности. Трябва да се отбележи, че тежките форми на лезии на панкреаса с опасност от тъканна некроза, както и панкреатит, придружен от сериозни нарушения на липидния метаболизъм, могат да бъдат придружени от реално или невярно (поради инхибиране на амилазата от триацилглицериди) понижаване на ензимната активност. Следователно, ако се подозира някаква форма на панкреатит, диагностично е важно не само да се определи активността на алфа-амилазата в урината и серума, но и да се изчисли клирънса на амилазо-креатинина по формулата:

При остър панкреатит тази изчислена стойност надвишава 6%. Изчисляването на клирънса позволява да не се прави корекция за обема и времето за събиране на урина и прави резултата по-малко зависим от използваните методи за определяне.

Заболявания на коремната кухина, с подобни симптоми с остър панкреатит: остър апендицит, перитонит, перфорирана стомашна язва и дуоденална язва. Активността на алфа-амилазата се увеличава с около 3-5, рядко с 10 пъти, като основната причина за хиперемиемията е не толкова повишената секреция на ензима, колкото неговата вторична абсорбция от коремните органи в кръвта. За да се разграничи диагнозата, се провежда определяне на алфа-амилаза и креатинин в урината и изчисляване на креатининовия клирънс чрез горната формула. С постоянна стойност на клирънса от 1 до 4%, трябва да се подозира заболявания на коремните органи, маскирани като остър панкреатит.

По същата причина активността на алфа-амилазата значително нараства при езофагеална перфорация, гастрит, остра чревна обструкция, исхемия и инфаркт на тънките черва, руптура на тръбите, салпингит, аортна аневризма.

При заболявания на вътрешните органи, които не са пряко свързани с храносмилателната система, е възможно умерено повишаване на активността на общата алфа-амилаза и / или нейните изоензими. Такива заболявания включват: холецистит, холелитиаза, увреждане на бъбречния паренхим и възпалителни заболявания на този орган, бъбречна недостатъчност, простатит, диабетна кетоацидоза, метастази на злокачествени тумори в тъканите и органите (особено в белите дробове, панкреаса, напречното дебело черво). Ако се подозират описаните по-горе патологии, се извършва сравнителен анализ на общата и панкреатичната алфа-амилаза, тъй като заболяванията на изоензима се увеличават главно при описаните заболявания (онкологичното увреждане на панкреаса и напречното дебело черво повишава активността както на P, така и на S изоензимите, което прави възможно разграничаването от възпалителни заболявания на същите органи).

Хиперамалаземията с непанкреатичен произход се среща и при заболявания на слюнчените жлези и някои мозъчни патологии. В този случай повишаването на общата алфа-амилазна активност също се дължи на повишаване на активността на слюнчения изоензим и за да се диференцира диагнозата, трябва да се извърши паралелно измерване на общата и панкреатичната алфа-амилаза (с нормална активност на Р-амилаза, може да се подозира гореспоменатата патология).

Сравнителен анализ на активността на алфа-амилаза в урината и серума също е ценен диагностичен параметър при оценката на бъбречната патология. Когато е нарушена бъбречната филтрация (при нефротичен синдром, гломерулонефрит и др.), Активността на алфа-амилазата в урината е рязко намалена, докато в кръвта се забелязва умерена или значима хипераммазия, следователно коефициентът на серумна амилаза / амилаза в урината е един от основните диагностични параметри. с тази патология.

Постоперативни състояния (системна възпалителна реакция на операция, развитие на ARDS и др.) Също могат да причинят умерена хиперамилаземия.

Намаляването на активността на алфа-амилазата обикновено съпътства намаляване на функционалната активност на панкреаса, причинено от увреждане на паренхима на органа и / или нарушена екзокринна регулация, и най-често се случва, когато:

Некротични промени в панкреаса, свързани с хеморагичен панкреатит и тотална панкреасна некроза.

При чернодробни заболявания (хепатит, цироза). Злокачествени тумори, особено при чернодробни метастази.

Тежък ендокринен дисбаланс: хипотиреоидизъм, захарен диабет, хиперлипемия (особено с излишък на триацилглицериди, поради инхибиране на ензимния активен център), с общо хранително разстройство, кахексия и токсикоза при бременни жени.

В някои случаи, с описаните по-горе патологии, серумната активност на алфа-амилазата може да не се понижи, но да остане непроменена.

Основните връзки в диференциалната диагноза на патологиите със сходни симптоми.

Най-често срещаните съотношения са:

Общо алфа-амилаза / панкреатичен компонент. Използва се в диференциалната диагноза на възпалителни и злокачествени процеси в коремните органи и някои други тъкани. При възпалителни процеси, които не засягат панкреаса, основният източник на активност на общата алфа-амилаза е слюнченият ензим, следователно съотношението "Обща амилаза / панкреатична изоформа"> 1. При злокачествени увреждания на коремните органи, приносът на двата изоензима е приблизително равен на 1, 8-2,4. С участието на панкреаса във възпалителния процес или в присъствието на туморни метастази в него, съотношението на обща и панкреатична амилазна активност не надвишава 1,5.

Общо алфа-амилаза / креатинин в урината и серума. Използва се изчисленият клирънс (формулата е дадена в параграф 3), позволява разграничаване на възпалителния процес в панкреаса (коефициент надвишава 6%) и коремни органи (1-4%).

Обща серумна алфа-амилаза / Обща алфа-амилаза в урината. Използва се за оценка на функционалната активност на бъбречния филтър. При нефротичен синдром и гломерулонефрит коефициентът е по-висок от 2-2,5.

Общо серумна алфа-амилаза / серумни триглицериди. Съотношението е "обратно", тъй като излишък от триацилглицериди може да инхибира активността на алфа-амилазата. Тя позволява да се диференцира патологичното намаляване на продукцията на ензима и интерференцията с хиперипия.

Обща серумна алфа-амилаза / панкреатична липаза. Биологичното и диагностично значение на коефициента е подобно на предишното съотношение, тъй като наличието на свободни триацилглицериди в серума е пряко свързано с активността на панкреатичната липаза. Пропорцията е пряка.

Промени в активността на алфа-амилазата при здрави хора. Интерференция с наркотици.

Активността на алфа-амилазата в кръвната плазма на здрави хора в значителна степен зависи от естеството на храната и храните, които преобладават в диетата. В допълнение, този параметър силно зависи от интензивността на метаболитните процеси в даден индивид, както и от мозъчната активност на субекта. Следователно, активността на ензима в същия индивид в различно време (дори по време на един и същи ден) може да варира в диапазона от 25-50% и в двете посоки.

Хипер-амилаземията при здрави хора може да бъде причинена от емоционално състояние (стрес, повишена умствена активност), пиене (дори веднъж) на алкохол и е свързано с диета, богата на протеини и изчерпана с въглехидрати и захари. Хипоамилаземията се проявява с увеличаване на усвояването на глюкозата, с гладуване, активно упражняване, както и при хора с хиперлипидемия, дори и при липсата на клинични прояви.

При бременност до 19 седмици, алфа-амилазната активност се понижава в сравнение с нормата, по отношение на до 33-34 седмици на бременността, нивото на активност се увеличава и до 37-40 седмици се стабилизира на ниво 10-20% по-високо от ензимната активност при здрави жени.,

Активността на алфа-амилазата и нейния панкреатичен изоензим също се влияе значително от използването на редица обичайни лекарства, използвани от практически здрави хора в случай на преходни инфекциозни и възпалителни заболявания - например, тетрациклинови антибиотици, фуроземид, кортикостероидни противовъзпалителни средства, салицилати.

Също така, значително влияние върху активността на алфа-амилазата имат лекарства, които водят до намаляване на сфинктера на Oddi, включително хормони (адреналин, хистамин, секретин), наркотични вещества (морфин, пантоп, опиум, кодеин) и други лекарства, които увеличават секрецията на ензима и потискат изтичането на секреция от панкреаса.

Въз основа на biofile.ru

Принцип на метода: Малтотриоза, свързан с хромогена 2-хлоро-р-нитрофенол, се използва като субстрат за а-амилаза. Под действието на а-амилаза, субстратът се хидролизира до освобождаване на оцветен 2-хлоро-р-нитрофенол, малтотриоза и глюкоза. Реакцията протича бързо и не изисква присъствието на коензими в реакционната смес. Скоростта на хидролизата на субстрата е право пропорционална на активността на а-амилазата в пробата и се измерва спектрофотометрично при дължина на вълната 405 nm.

Субстрат-CNF ————> CNF + глюкоза + малтотриоза

Линейност на метода: до 1500 U / l.

а-амилазата в негемолизиран серум остава стабилна при стайна температура (18-25 ° С) в продължение на 7 дни, при температура на съхранение от 2 до 8 ° С за 2 месеца.

1) спектрофотометър с контролирана температура, кювета с дължина на вълната 405 nm, дължина на оптичния път 1 cm; температура на реакцията 37 ° С;

3) Автоматични пипети за 25 μl и 1000 μl;

Слюнченият флуид може да се използва и като източник на ензим (слюнката е предварително разредена с дестилирана вода 100 пъти), но обхватът на нормата варира значително.

6) Работен реагент (субстрат - 1.8 mmol / l в MES-буфер (рН 6.0 ± 0.1)).

Работният реагент е подходящ за използване, ако оптичната му плътност не е по-висока от 0,6 единици оптична плътност. при дължина на вълната 405 nm и няма мътност.

Преди анализ реактивите трябва да се загреят до температурата на измерване (37 ° C).

Разбъркайте съдържанието на епруветката и включете хронометъра. Измерва се оптичната плътност на пробата срещу дестилирана вода с дължина 405 nm за точно 1 минута. Повторете измерването 3 пъти с интервал от 1 минута. Изчислява се промяната на оптичната плътност в минута, след което се изчислява средното измерване на оптичната плътност в минута (Dop / min).

Изчисляването на активността на а-амилазния фактор се извършва по формулата:

където Dop / min е средната промяна в оптичната плътност в минута;

1,025 - общият обем на разтвора в кюветата;

1000 е коефициентът на превръщане ml до l;

12.9 - милимоларен коефициент на поглъщане на 2-хлоро-р-нитрофенол;

0,025 е обемът на серума в ml;

1.0 е дължината на оптичния път.

При извършване на промени в изброените параметри факторът трябва да бъде преизчислен. Ако активността на а-амилазата надвишава 1500 U / l (точка извън линейността на калибрационната графика), анализираният серум трябва да се разреди 1: 1 с физиологичен разтвор и измерването да се повтори, а резултатът от изчислението да се умножи по 2.

Клинична и диагностична стойност: а-амилазата е ендохидролаза и в човешкото тяло е представена от няколко изоензима: ензимът се секретира от слюнчените жлези (S-тип), панкреаса (Р-тип); малка ензимна активност се открива в черния дроб, скелетните мускули, сълзотворната течност, секрецията на млечните жлези и различните тумори.

Активността на а-амилазата в серума се увеличава значително поради Р-изоензима при различни заболявания на панкреаса (панкреатит, абсцес, травма, рак).

При наранявания на слюнчените жлези (рак на слюнчените жлези, ендемичен паротит, макроамилаземия) активността на серумната а-амилаза също се увеличава, но за сметка на S-изоензима.

И двете а-амилазни изоензими имат малка молекулна маса (45,000), така че те се филтрират в бъбреците и се екскретират с урината. Увеличаването на активността на уринарната амилаза (диастаза) при остър панкреатит настъпва 6-10 часа по-късно, отколкото в кръвния серум.

Въз основа на biohimist.ru

Принципът на метода. Алфа-амилазата катализира хидролизата на неразтворим оцветен субстрат от нишесте, за да образува синьо водоразтворимо багрило. Количеството на освобождаваното багрило е пропорционално на активността на ензима.

Курсът на определяне. За определяне на активността на алфа-амилазата в серума или урината се приготвят паралелни експериментални и контролни проби и се анализират в следната последователност:

Пробите се смесват, оставят се да престоят 15 минути, центрофугират се при 3000 rpm в продължение на 5 минути. След това се измерва оптичната плътност на експерименталната проба срещу контрола в FEC при дължина на вълната 590 nm в кювети с дебелина на слоя 5.0 mm.

Активността на ензима се намира в калибрационния график.

Клинична и диагностична стойност за определяне на активността на алфа-амилазата в серума и урината: при хора, алфа-амилазата се секретира от панкреаса и слюнчените жлези, неговата малка активност се открива в тъканите на черния дроб и скелетните мускули. Молекулното тегло на ензима е относително ниско ("48,000"), така че се филтрира в гломерулите на бъбреците и се съдържа в урината.

При здрави хора серумната ензимна активност е от 140 до 350 U / l, в урината от 1000 до 2000 U / l. Амилазната активност се увеличава главно при заболявания на панкреаса (при остър панкреатит). Заболяванията на слюнчените жлези и хроничните бъбречни заболявания водят до повишаване на активността на серумната алфа-амилаза.

Работа номер 5. Ефектът на адреналина върху глюкозата в кръвта.

Напредък в работата. В заек, от пределната вена на ухото или в плъх от каудалната вена, се събира 0,1 ml кръв и се определя кръвната глюкоза по метода о-толуидин.

След това животното има нарязана настрани коса, триене на кожата с алкохол и 0.1% разтвор на адреналин се взема подкожно в размер на 0.1 ml на 1 kg тегло, а след 30 минути отново се измерва кръвната глюкоза.

Работа номер 6. Влиянието на инсулина върху кръвната захар.

Напредък в работата. От друг заек от пределната вена на ухото или от плъх от каудалната вена, вземете 0,1 ml кръв и определете съдържанието на глюкоза в кръвта.

В животното, отрежете козината от едната страна, третирайте я с алкохол и инжектирайте подкожно инсулин в размер на 1,5 международни единици на килограм тегло. Един час по-късно отново се определя кръвната захар. Животното се поставя подкожно с 5% разтвор на глюкоза, за да се предотврати инсулинов шок: заек 10 ml, плъх - 1 ml.

Резултатите от 3-та и 4-та работи на масата и правят изводи.

Въз основа на материали www.ronl.ru

α-амилаза (диастаза, 1,4-a-D-глюкан хидролаза, EC 3.2.1.1.) катализира хидролизата на α-1,4-глюкозидни връзки на нишесте, гликоген и свързаните с тях полизахариди към малтоза, декстрини и други полимери. Молекулярната маса на ензима е около 48,000 D. Молекулата съдържа калциев атом, който не само активира ензима, но и го предпазва от действието на протеазите, а активността на амилазата се увеличава с влиянието на хлорни йони. В кръвта тя е представена от два изоензима: панкреатичен - Р-тип и слюнчен - S-тип, всеки от които е разделен на няколко фракции. Изоензимът от S-тип обикновено е 45–70% (средно 57%), а останалото е от типа P. И двата изоензима имат почти идентични каталитични и имунологични свойства, леко се различават по електрофоретичната подвижност, но са добре разделени чрез гел филтрация върху DEAE - Sephadex. Има и макроамилаза, която не се екскретира от бъбреците, но може да се открие в нормален кръвен серум (около 1% от здравите хора) и патология (2,5%).

Висока амилазна активност се наблюдава в паротидната и панкреасната жлеза. Въпреки това, неговата активност, макар и много по-ниска, се открива в големите и тънките черва, скелетните мускули, черния дроб, бъбреците, белите дробове, фалопиевите тръби, мастната тъкан. В кръвта ензимът се свързва както с плазмените протеини, така и с образуваните елементи. Ензимната активност е еднаква за мъже и жени и не зависи от естеството на приеманата храна и времето на деня.

Съществуващите методи за изследване на активността на а-амилазата в биологичните течности се разделят на две големи групи:

1. Захарифициране (редуктометрично), основаващо се на изследването на захарите, образувани от нишесте чрез редуциращия ефект на глюкоза и малтоза.

2. Амилокластици, въз основа на определянето на остатъка от неразложеното нишесте: t

  • според степента на интензивност на реакцията му с йод. Тези методи са по-чувствителни и специфични, но тяхната точност до голяма степен зависи от качеството на нишестето и от оптимизацията на условията за определяне.
  • вискозитет суспензия на скорбяла, не са с висока точност и не се използват сега.

3. Методите, използващи хромогенни субстрати - се основават на използването на комплекси субстрат - багрило, които под действието на а - амилаза се разпадат, за да образуват водоразтворимо багрило.

4. Методи, основани на свързани ензимни реакции: t

Скорбяла + Н2За Малтоза + Малтотриозе + Декстрин

Maltose + N2Около 2 глюкози

Глюкоза + АТФ Глюкоза - 6 - F + АТФ

Глюкоза-6-F + NADF глюконат-6-F + NADFN

Активността на ензима се определя от скоростта на натрупване на NADPH.

Два амилокластични метода бяха одобрени като унифицирани: Karavey (с устойчив нишестен субстрат) и Smith-Rohe.

α-амилазата катализира хидролизата на неразтворим оцветен субстрат от нишесте, за да образува синьо водоразтворимо багрило. Количеството на освобождаваното багрило е пропорционално на каталитичната активност на ензима.